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认识对虾白斑综合症

2021-12-17 / 技术新闻

作为被列入国家农业部列入水生生物一类动物疫病的水产传染疾病,相信水产养殖的朋友都知道对虾白斑综合症。对虾白斑综合症是当今对虾养殖最大的威胁之一,在上世纪90年代,曾经在我国及东南亚各国大流行,造成巨大的经济损失。一旦对虾白斑综合症在一个地区流行,对于对虾产业造成的伤害往往是毁灭性的。2009年墨西哥普埃布拉州爆发对虾白斑综合症,从2009年到2013年,对虾产量从9万吨迅速减少至1.2万吨,养殖户损失惨重,大量养殖人员失业。下面,我们就来认识对虾白斑综合症。



病原


对虾白斑综合症有对虾白斑综合症病毒(WSSV)引起。用电镜观察,白斑病毒 WSSV是一种杆状、有核壳、非闭合病毒粒子,核壳由排列整齐的附着亚单位环状结构组成,表面有尾状突出,从核壳末端伸出,核壳闭合,一端呈圆形,一端呈方形。Kasom- chandra 等发现,不同地理区域分离的WSSV有区别,他们测得完整颗粒及尺寸是 83~120× 270~330nm,日本分 离株 最小,中国株最大。



病毒电镜下照片


WSSV主要感染对虾,感染率一般为10-20%,死亡率在 80%以上,传染途径主要是通过受感染的对虾在繁殖期将病毒粘附在虾卵上传播,甚至使螃蟹等甲壳动物也染此病毒,病毒主要感染循环系统的血细胞及其外胚中胚细胞,因而是全身性发红。白斑综合征是水生动物严重的急性传染病,死亡率极高,病毒可使感染的对虾在 3~10 天内 100%死亡, WSSV的宿主已知的有 43种,凡甲壳纲水生动物都能受感染,有些不一定死亡,但能携带病原体。



症状


发病前期∶症状不明显,剥取甲壳,擦拭后朝向阳光细心观察,可见少量针尖大小的白色斑点,无其他异常表现。


发病中期∶虾体变软,肌肉白浊,肠胃食糜很少,挤压有黄色脓液从肛门流出,头胸甲较易剥离,头胸甲上的白斑变大增多,肉眼清晰可见,对虾摄食量明显减少,应激反应较为强烈。


发病后期∶全身布满白斑,肝胰腺肿胀,颜色变淡,有的糜烂,血液难以凝固,头胸甲很易剥离,病虾体弱,失去弹跳能力,体色淡红、暗红或棕红色,漫游、伏边及贴底死亡等。



患病虾头胸甲易剥离


患病虾头胸甲易剥离,壳上可见白色斑点


患病虾胸甲上可见白色斑点



诊断


WSSV主要的诊断方法有∶症状及病例变化诊断法、电子显微技术、生化检验法、细胞培养方法、免疫学的 ELSA技术、分子生物学的核酸探针和 PCR技术等。其中 PCR 诊断技术因具有简便快速、灵敏度高等优点,特别适合于生产上大规模检测,已成为检测的重要手段。下面,我们重点介绍几种常见实用的诊断方法。


传统诊断法  传统的诊断方法以病理学检测和生物诊断法为主。感病组织通过组织切片和 H-E染色可观察到组织细胞具有典型的核肿大和核内嗜酸两性着染病变。超薄切片经透射电镜观察可见到细胞核内的杆状病毒粒子。Lightner的 Giemsa染色涂片法,整个制样过程只需 2h左右,仅需1台光学显微镜,但染色效果不理想。何建国等用生物检测法检测 WSSV,将样品处理后接种健康易感对虾,以接种对虾是否发病死亡并出现甲壳下白斑等典型症状作为判定标准。

免疫学方法  于佳等用 WSSV制备单克隆抗体,用此单抗进行对虾感染组织切片的酶联免疫染色,进行现场样品的检测,结果与对照组切片H-E染色结果较为一致。涂小林等用纯化病毒多克隆血清作一抗建立检测病毒的ELISA方法,取得了较好的检测效果。NadalaEc等以病毒多克隆血精作~抗,应用 Western blot 检测对虾血淋巴和鳃中的病毒,在感染对虾出现症状之前,即可高度特异地检出病毒大小为19,23.5,27.5K三条核衣壳主要条带,由于采取血淋巴不需要处死对虾本身,因此,该方法适用于亲虾带毒的检测。

PCR法   Lo-Chu Fang 等根 据 WSSV基因组克隆序列设计 PCR 引物,建立 PCR 检测方法,获得成功。Kim Ck 等建立的 PCR 方法可测出 lpg 的 WSSV基因组 DNA,能有效地从白斑综合症病虾中或用其它检测法检测不出阳性的亲虾中扩增出特定的条带。Lourdes M Tapay 等建立的 PCR能从实验感染和自然感染对虾中检测出4个不同地区的WSSV分离株。朱山等根据己知昆虫杆状病毒多角体保守区序列设计 PCR 引物对 WSSV感染对虾组织和正常对虾组织进行差异PCR,结果感染组织扩增出特定条带,而正常组织无条带。PCR 法大幅度提高了诊断的敏感性。目前逐渐普及的实时荧光PCR技术更是大大提高了WSSV检测的通量和效率,此技术已经在广大水产养殖及检测站点大量推广。



防治


目前对虾白斑综合症没有药物可以治疗,一旦发病很难控制。实际防治中主要以预防为主。预防措施主要有∶做好养殖池塘的清淤、消毒及培水;选择健康无病毒的虾池进行放养;饲养管理过程中要注意水质及各种理化因子的变化,保持水体的相对稳定;投喂营养全面的颗粒饲料。

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