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什么是气溶胶污染?

2021-12-17 / 技术新闻

做PCR检测被核酸污染所困扰?假阳性让你焦头烂额?

环境中的气溶胶污染是造成PCR结果假阳性最常见的因素。想最大程度降低PCR实验污染概率,确保检测结果的准确性,我们首先来认识认识这其中的罪魁祸首——气溶胶



什么是气溶胶?



概念:气溶胶是指悬浮在气体介质中的固态或液态颗粒所组成的气态分散系统。


说人话版本:气溶胶是固体或液体悬浮在空气中的微米级颗粒,空气和颗粒像胶水一样难舍难分。用水浸泡手机,不管泡多久手机都不会化到水里(会坏不要学),往水里加点盐,盐会溶解,变成液体的一部分。而介于二者之间的,就是胶体。如墨水,其颜料颗粒不会溶解到水中,又因为尺寸较小、可以比较稳定地悬浮在水里。像云、雾、烟等这些都是天然的气溶胶。如果一种物质颗粒尺寸较小、可以较为稳定地在空气中悬浮,就可以形成气溶胶,所以气溶胶几乎无处不在。




电梯里有人吸烟后,哪怕过了半个小时进入还能闻到烟味,这正是因为烟雾形成了气溶胶在空气中漂浮,在通风不良的封闭空间里气溶胶能存在非常久,病原体也会以这种方式存在。换句话说,如果一个通风不良的封闭空间里面有病原体,往往会存在非常长时间,这种带病原体的气溶胶被称为:生物-气溶胶。


核酸检测灵敏度高、特异性强,在操作过程中容易受到污染,导致结果假阳性,而气溶胶几乎无处不在,在通风不良的封闭空间会存在非常久,所以PCR检测最常见且最难消除的污染就是气溶胶污染。



如何减少PCR产物污染?


气溶胶污染主要发生在PCR产物分析阶段,因为PCR产物拷贝数大( 指数增长) ,所以极微量的气溶胶可能就会造成假阳性。


1、合理的管理和操作,能降低污染的可能性,从而减少污染。例如做好实验室日常清洁,戴手套等全身防护,使用带滤芯的枪头,按实验指南操作等等。




2、因为在空气与液体面摩擦时会形成气溶胶,比如剧烈地摇动反应管,开盖吸样,还有反复吸样等都可形成气溶胶污染,因此减少开盖对防气溶胶污染至关重要。




3、利用UDG酶选择性水解含dU的DNA单链或DNA双链的机制,巧妙地引入dUTP取代PCR体系中的dTTP而构成dUTP/UDG酶防污染系统。稳定使用该系统,可有效消除PCR体系中混入的扩增残留污染物(多以气溶胶形式存在),保证扩增结果的准确性。





产品介绍


方舟实时荧光定量PCR仪采用实时荧光探针法,一次提取,一管式试剂,一步加样, 一步扫码,即可进行检测,直接显示结果。 




产品特点:

1.操作简单,精准高效,自动判读,单人可操作,检查结果机器自动判读,减少人为干扰,简单精准。

2.操作简便,方便使用;反应过程无需开盖,有效减少气溶胶污染。

3.dUTP/UDG酶防污染系统,有效减少假阳性;加入UDG酶,dUTP取代PCR体系中的dTTP,有效减少假阳性。




怀疑发生污染怎么办?


1、监测发现污染并及时处理

如果对结果有疑惑,可以在实验过程中添加阴性对照、无模板对照等阴性质控品来检验体系中的污染,以确保对污染的及时发现。例如加入无菌水做空白对照,与样品一起加入机器,来判断是否有气溶胶污染,早发现早解决。


2、紫外灯照射

实验结束后打开紫外灯进行紫外消毒,照射时间≥1h能有效灭杀空间内的生物-气溶胶。其原理为:在254nm紫外诱导下DNA链上相邻的嘧啶发生交联,嘧啶二聚体无法被切除 ,DNA聚合酶被阻碍或者DNA不能被完全变性,使合成反应终止。但该方法只对500bp以上的片段有效,对短片段效果不大。




3、次氯酸钠

次氯酸钠具有氧化损伤核酸的作用,可以将留在实验室的扩增产物破坏掉。先用75%酒精对实验室空气进行密集喷淋,能让实验过程中生成的气溶胶产生较好的沉降效果。喷淋结束立即用次氯酸钠擦拭工作台面/拖擦地面,作用10min后再用清水擦拭工作台面,并保持通风。




实验室核酸检测防治污染包括但不限于以上这些措施,实际真的发生污染是很难根除的,防远大于治,为了避免由于气溶胶污染造成的假阳性等现象,保障检测结果的准确性,检测人员必须严格遵守操作规程,把"防污染”贯穿于整个实验过程中。



养殖行业


随着我国养殖业的不断发展,由传染病所造成的危害日愈突出。各种病毒与细菌以及寄生虫病混合感染或继发感染,病毒的变异以及细菌耐药性的产生,是目前动物疫病难防难控的主要原因。我国淡水养殖产量在逐年提升,然而日趋严重的病害问题不仅给水产养殖者造成巨大的经济损失,而且严重威胁水环境安全、水产品质量以及人类安全。基于此,对各种病原体的准确诊断,尤其是早期、快速诊断尤为重要。



宠物行业


随着人们生活水平的提高,宠物的养殖量大大增加,宠物传播的传染病也越来越引起人们的重视。比如弓形虫、钩端螺旋体、狂犬病等,都给人们的生命和健康造成很大的危害和威胁。为了预防和控制这类传染病的发生,除了疫苗免疫预防之外,早期诊断也是很有力的手段。



方舟实时荧光PCR仪


方舟实时荧光定量PCR仪采用实时荧光探针法,设计特异的靶标序列及荧光探针,PCR每扩增一条DNA分子,释放一个荧光信号,可以在循环过程中任一点检测荧光,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成同步,不仅实现了对靶基因的准确定量,同时很大程度上提高了扩增特异性,缩短了检测时间。实时荧光PCR检测技术可对动物发病病因及其身上携带的病原体进行快速、高效的诊断,从而为临床用药、疫苗免疫预防提供准确指导,有力的提高了动物疫病防疫能力。总之,PCR技术在动物疫病研究和诊断方面,已成为非常实用的工具,PCR技术无疑将广泛地应用于兽医学领域,包括诊断病原、基因表达、遗传病检测、肿瘤细胞监测等方面。


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